Sütte Bulunan Eksozomların Nano-LC Sisteminde Analizi

Abstract

ÖZET: Bu tez çalışmasının amacı, ters faz nano-sıvı kromatografisi (nano-LC) için yeni metakriloil grafen oksit nano partikül (MGONP) bazlı hidrofobisitesi artırılmış monolitik nano kolonların hazırlanması ve bu kolonların süt numunelerinden eksozomların ayrımı ve analizi için nano-LC sisteminde kullanılması olarak belirlenmiştir. Bu bağlamda, çalışma kapsamında MGONP’leri grafit kullanılarak elde edilmiş ve MGONP içeriğine sahip monolitler hazırlanarak karakterizasyon çalışmaları yapılmıştır. İlk olarak, monolitik kolonlar, butilmetakrilat (BMA), etilen dimetakrilat (EDMA) ve MGONP içeren solüsyonlar hazırlanmış, porojenik çözücü olarak dimetilformamid (DMF) ve su kullanılmıştır. Hazırlanan polimerik solüsyon 50 μm i.d.’lik fused silika kapiler kolonlar içerisine enjekte edilerek in-situ polimerizasyon yöntemi ile monolitik kolonlar hazırlanmıştır. Hazırlanan kolonların hidrofobisitesinin artırılması için, kolonlar dimetiloktadesilklorosilan (DODCS) ile modifiye edilmiştir. Karakterizasyon için monolitik kolonların morfolojik yapıları SEM görüntüleri ve FT-IR analizleri ile incelenmiştir. Ayrıca, hazırlanan monolitik nano kolonların kromatografik karakterizasyonu nano-LC’de alkilbenzen homologları kullanılarak yapılmıştır. Karakterizasyonu yapılmış monolitik kolonlar kullanılarak nano-LC sisteminde sütten ekstrakte edilen eksozom ayırımı ve analizi için kromatografik optimizasyon çalışmaları yapılmıştır. Eksozomlar karakterizasyon ve tanımlamaları için NTA, SEM, FT-IR kullanılmış ve sonrasında etkin olarak nano-LC’de kromotografik analizleri yapılmıştır. Geliştirlen yöntemin etkin sonuç verdiği ve yeni bir yaklaşımla eksozom izolasyon yöntemi geliştirilmiş olduğu görülmüştür.

ABSTRACT: The aim of this thesis is to prepare methacryloyl graphene oxide nanoparticles (MGONPs) based monolithic nano-columns with increasin hydrophobicity for the separation and analysis of exosomes in milk samples. In this thesis, graphite was used for the synthesis of MGONPs and the preparation adn characterization of the developed monolithic columns were performed. Firstly, the monolithic columns are prepared using polymeric solutions composing of BMA EDMA and MGONPs and DMF/H2O as porogenic solvent. The final solution for monolithic column preparation was injected into the fudes silica capillary column with 50 μm i.d. in order to make in-situ polymerization. Final monolithic columns are modified for the increasing their hydrophobicity, which is neccessary for exosome separation and analysis. SEM images and FT-IR are applied for the characterization of monolithic columns as well as chromatographic characterization with homologous alkylbenzenes. The characterized monolithic olumns are applied for the separation and analaysis of exosomes in milk samples by using reversed-pahse nano-LC. In addtion to nano-LC studies, NTA, SEM and FT-IR are used for the tandem characterization of exosomes. All results shows that the developed tecnique is a novel and promising methadology for exosome isolation and it is proposed as a novel approach for exosome isolation.