Kimya

Glutatyon S-Transferaz (GST) Enziminin Tavuk Yüreğinden Saflaştırılması ve Karakterizasyonu

Sun, 01 Jan 2023 00:00:00 GMT

Glutatyon S-Transferaz (GST) Enziminin Tavuk Yüreğinden Saflaştırılması ve Karakterizasyonu ZOR, Suat ÖZET: Glutatyon S-transferaz enzimi (GST; EC 2.5.1.18) metabolizmada önemli bir antioksidan enzimdir ve glutatyonun toksisite oluşturabilecek birçok metabolitle konjugasyonunu sağlayan reaksiyonlarda görev alır. Bu tez kapsamında, GST enzimi tavuk yüreğinden homojenatın hazırlanması, amonyum sülfat çöktürmesi ve glutatyon-agaroz afinite kromatografisi vasıtasıyla 9,048 EÜ/mg protein spesifik aktivite ve %40 verimle 20,99 kat saflaştırıldı. Daha sonra enzim saflığının kontrol edilmesi ve alt birim molekül kütlesinin belirlenmesi amacıyla sodyum dodesil sülfat poliakrilamit jel elektroforezi (SDS-PAGE) yapılarak tek bant elde edildi. SDS-PAGE ile saflaştırılan GST enziminin alt birim molekül kütlesi yaklaşık 20,94 kDa olarak bulundu. Saflaştırılan GST enzimi için yapılan karakterizasyon çalışmalarında optimum pH, (Tris-HCI tamponunda) pH= 8,5, optimum iyonik şiddet, (Tris-HCI tamponunda) 0,2 M, stabil pH, (Tris-HCI tamponunda) pH = 8,5 ve optimum sıcaklık 60 oC olarak bulundu. Ayrıca Lineweaver-Burk grafiklerinden faydalanılarak enzime ait KM ve Vmax değerleri sırasıyla GSH substratı için KM, 0,087 mM, Vmax 0,625 EÜ/mL; CDNB substratı için KM, 0,798 mM, Vmax, 1,141 EÜ/ mL olarak hesaplandı.; ABSTRACT: Glutathione S-transferase enzyme (GST; EC 2.5.1.18) is an important antioxidant enzyme in metabolism and takes part in reactions that provide conjugation of glutathione with many metabolites that may cause toxicity. Within the scope of this thesis, the GST enzyme, which has 9,048 EU/mg protein specific activity, was purified 20.99-fold with 40% yield by means of preparation of homogenate from chicken heart, ammonium sulfate precipitation and glutathione-agarose affinity chromatography. Then, sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) was performed to control the enzyme purity and to determine the subunit molecular mass, and a single band was obtained. The subunit molecular mass of the GST enzyme purified by SDS-PAGE was found to be approximately 20.94 kDa. In the characterization studies for the additionally purified GST enzyme, optimum pH (in Tris-HCl buffer) pH= 8.5, optimum ionic strength (in Tris-HCl buffer) 0.2 M, stable pH, (in Tris-HCl buffer) pH = 8, 5 and the optimum temperature is 60 oC; also, using Lineweaver-Burk graphs, the KM and Vmax values of the enzyme were determined as KM, 0.087 mM, Vmax 0.625 EÜ/mL for the GSH substrate; For CDNB substrate, KM was calculated as 0.798 mM, Vmax was calculated as 1.141 EU/mL.

Purification and Characterization of Glutathione Reductase From Japanese Quail (Coturnix Coturnix Japonica) Liver

Sun, 01 Jan 2017 00:00:00 GMT

Purification and Characterization of Glutathione Reductase From Japanese Quail (Coturnix Coturnix Japonica) Liver MOHAMMED TAHER, Sarkat Salim ABSTRACT: In this study, glutathione reductase (Glutathione: NADP+ oxidoreductase, E.C 1.8.1.7; GR) was purified from quail`s liver by using ammonium sulfate precipitation and 2',5'-ADP Sepharose-4B gel affinity chromatography. GR enzyme was obtained having a specific activity of 22.75 EU/mg proteins, with a yield 13.6% and 142.18 purification fold. Enzymatic activity was measured spectrofotometrically according to Beutler`s method at 340 nm. Subunits molecular weight of enzyme was determined by SDS-PAGE as 59 kDa. Optimal pH, optimal ionic strength, stable pH, optimal temperature were determined as 8.0, 0.6 mM, 8.0, 85 °C respectively. Also KM and Vmax values were determined for NADPH as 0.109 mM and 0.603 EU/mL; and for GSSG substrates 0.044 mM and 0.272 EU/mL respectively.; ÖZET: Yüksek lisans tezi olarak sunuçu bu çalşmadan, glutatyon redüktaz (Glutatyon: NADP+, oksidoredüktaz, E.C 1.8.1.7.; GR) enzimi bıldırcın karaciğerinden amonyum sülfat çöktürmesi ve 2',5'-ADP Sepharose-4B afinite kromatografisi olmak üzere 2 basamakta saflaştırıldı. 22,75 EÜ/mg protin spesifik aktivitesine sahip olan GR enzimi %13,6 verimle, 142,18 kat saflaştırıldı. Enzim aktivitesi spektrofotometrik olarak 340 nm‟de Beutler metoduna göre ölçüldü. Enzimin alt biriminin mol kütlesi ise SDS-PAGE ile 59 kDa olarak bulundu. Enzim için optimum pH, optimum iyonik şiddet, optimum sıcaklık, stabil pH, sırasıyla 8, 100 mM, 8, ve 85ºC olarak bulundu. Ayrıca NADPH için KM değeri 0,109 mM ve Vmax değeri 0,603 EÜ/mL olarak; GSSG için ise, KM değeri 0,044 mM ve Vmax değeri 0,272 EÜ/mL olarak tespit edildi.

Elazığ'da Yetişen Madımak (Polygonum Cognatum Meissn) ve Labada (Rumex Patientia L.)'nın Sitotoksik, Antioksidan ve Antimikrobiyal Etkilerinin Araştırılması

Wed, 01 Jan 2020 00:00:00 GMT

Elazığ'da Yetişen Madımak (Polygonum Cognatum Meissn) ve Labada (Rumex Patientia L.)'nın Sitotoksik, Antioksidan ve Antimikrobiyal Etkilerinin Araştırılması PEKDEMİR, Sibel ÖZET: Bu çalışmada Elazığ yöresinden toplanan ve özellikle gıda olarak tüketilen Polygonum cognatum Meissn (Madımak, Kuşekmeği) ve Rumex patientia L. (Labada) bitkilerinin metanol, etanol, aseton ve hekzan ekstraktlarının fitokimyasal bileşenleri, antiradikal ve antimikrobiyal aktiviteleri ve sitotoksik/apoptotik etkileri araştırıldı. Antioksidan çalışma sonuçlarına göre, hem Polygonum cognatum Meissn hem de Rumex patientia L. bitki eksraktlarının ABTS radikal giderme aktivitelerinin DPPH’a kıyasla daha iyi sonuç verdiği görüldü. Polygonum cognatum Meissn ve Rumex patientia L. bitkilerinin metanol ekstraktlarının ABTS radikal giderme aktivitelerinin en yüksek olduğu değerler sırasıyla %97,06 ve %96,85 olarak bulundu. Bitki ekstraktlarının DİSK ve MİK yöntemleriyle Escherichia coli, Bacillus subtilis, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus and Candida albicans mikroorganizmaları üzerindeki antimikrobiyal etkileri incelendi ve sonuçta tüm bitki ekstraktlarının mikroorganizma gelişimini engellediği görüldü. Vitamin ve sterol analizlerinde Rumex patientia L. bitkisinin tokoferol ve total sterol miktarlarının daha yüksek çıktığı görülürken, K ve D vitamini miktarlarının ise Polygonum cognatum Meissn bitkisinde yüksek olduğu görüldü. Her iki bitkinin ekstraktlarının tamamında doymamış yağ asitleri değerlerinin oldukça yüksek çıktığı ve özellikle esansiyel yağ asitleri miktarlarının Rumex patientia L.’ nin metanol ekstraktı için %58,41 (18:3); %13,10 (18:2) ve Polygonum cognatum Meissn’ in metanol ekstraktı için ise %46,82 (18:3); %16,98 (18:2) olduğu belirlendi. Antikanser aktivitelerinin belirlenmesinde WST-1 yöntemi kullanıldı ve bitki özütlerinin MCF-7, PC3 ve MKN-45 kanser hücre hatları üzerindeki etkilerine bakıldı. Polygonum cognatum Meissn ve Rumex patientia L. bitki ekstraktlarının MCF-7 ve PC3 kanser hücre hatlarına kıyasla MKN-45 hücre hattında daha etkili olduğu görüldü. Test sonuçlarına göre Polygonum cognatum için MKN-45 hücre hattında en düşük IC50 değerleri hekzan, aseton, etanol ve metanol ekstraktlarında sırasıyla 1,84, 5,90, 11,03 ve 33,03 μg/mL olarak belirlendi. Rumex patientia L. bitkisinin MKN-45 hücre hattında en düşük IC50 değerleri metanol, hekzan ve etanol ekstraktlarında sırasıyla 64,81, 81,62 ve 92,63 μg/mL olarak tespit edildi.; ABSTRACT: In this study, the phytochemical components, antiradical, antimicrobial activities, and the cytotoxic/apoptotic effects of the methanol, ethanol, acetone and hexane extractions were investigated, hereby, Polygonum cognatum Meissn (Madımak, Kuşekmeği) and Rumex patientia L. (Labada) plants were collected from Elazığ region and especially consumed as food. The Polygonum cognatum Meissn and Rumex patientia L. plant extractions showed better results than ABTS radical scavenging activities compared to DPPH. The highest ABTS radical scavenging activities of Polygonum cognatum Meissn and Rumex patientia L. plants were found to be 97.06% and 96.85%, respectively. The antimicrobial effects of plant extracts on Escherichia coli, Bacillus subtilis, Klebsiella pneumonia, Staphylococcus aureus, and Candida albicans microorganisms were examined by DISK and MIK methods, and it was found that all plant extracts prevent microorganism development. In vitamin and sterol analysis, the tocopherol and total sterol amounts of Rumex patientia L. plant were higher compared with Polygonum cognatum Meissn plant. On the other hand, the K and D vitamin levels were higher in the Polygonum cognatum Meissn plant. The unsaturated fatty acids values were found to be quite high in all extracts and especially the amount of essential fatty acids was 58,41% (18:3), 13,10% (18:2) for the methanol extracted from Rumex patientia L., 46,82% (18:3) and 16,98% (18:2) for the methanol extracted from Polygonum cognatum Meissn. WST-1 method was used to assign anticancer activities, thus the effects of plant extraction on MCF-7, PC3, and MKN-45 cancer cell lines were examined. The extracted Polygonum cognatum Meissn, and Rumex patientia L. plant, were found to be more effective in the MKN-45 cell line compared to MCF-7 and PC3 cancer cell lines. The lowest IC50 values in the MKN-45 cell line for Polygonum cognatum Meissn were determined as 1,84, 5,90, 11,03, and 33,03 μg / mL in hexane, acetone, ethanol, and methanol extracts, respectively. The lowest IC50 values of the Rumex patientia L. plant in the MKN-45 cell line were observed as 64,81, 81,62, and 92,63μg / mL in methanol, hexane, and ethanol extracts, respectively.

Determination of Serum Fatty Acids Profile in Patients Undergoing Myocard Infarct in Erbil

Sun, 01 Jan 2017 00:00:00 GMT

Determination of Serum Fatty Acids Profile in Patients Undergoing Myocard Infarct in Erbil ISMAEL, Saman Tawfeeq ABSTRACT: In this master's thesis study, fatty acids profile, lipid profile, and cardiac biochemical's were studied in myocardial infarction and compared with healthy individuals at Erbil province in Iraq. First about cardiac biochemical's shows the mean S. troponin and CK-MB levels in the normal and MI groups. The results obtained indicate that the mean level of S. troponin and CK-MB in MI group were significantly very higher than that of control group (p<0.0001). Then about fatty acid composition provides the Mean ± SD, of each of the total saturated, monounsaturated and poly unsaturated fatty acids in control and MI groups, the results obtained that the mean of S. total saturated fatty acids in MI group was non-significantly higher than that of control group, S. total monounsaturated fatty acids in MI significantly (P<0.05) lower than that of control group, and S. total polyunsaturated fatty acids in MI group significantly (P<0.001) lower than that of control group. Finally, the Mean ± SD, of each of the lipid profile, indicated that each of S. triglycerides and S. total cholesterol in MI were significantly higher than that of controls (P<0.001), S.LDL in MI group was significantly higher than that of controls (P<0.0001), while S.HDL in MI group was significantly lower than that of control group (P<0.001).; ÖZET: Bu yüksek lisans tez çalışmasında Irak’ın Erbil şehrinde miyokard enfarktüsü geçiren hastalarda yağ asidi profili, lipid profili ve kardiyak biyokimyasal değerler çalışıldı ve sağlıklı bireylerle karşılaştırıldı. Önce kardiyak biyokimyasal veriler normal ve MI gruplarında S. troponin ve CK-MB düzeylerini göstermektedir. Elde edilen sonuçlar, MI grubunda ortalama S. troponin ve CK-MB seviyesinin kontrol grubuna göre anlamlı derecede yüksek olduğunu göstermektedir (p <0,0001). Daha sonra, yağ asidi bileşimi, kontrol ve MI gruplarındaki toplam doymuş, tekli doymamış ve poli doymamış yağ asitlerinin ortalama ± SD'sini sağlar; elde edilen sonuçlar, MI grubundaki toplam S. doymuş yağ asitlerinin ortalamasının, MI grubundaki ortalama doymamış yağ asitlerinin ortalamasının, kontrol grubuna göre S. toplam mono-doymamış yağ asitleri, kontrol grubuna göre anlamlı derecede düşük (P <0,05) ve MI grubunda S. çoklu doymamış yağ asitleri kontrol grubuna göre anlamlı olarak düşük (P <0,001) bulundu. Son olarak, her bir lipid profilinin ortalama ± SD, MI'daki S. trigliseridlerin ve S. total kolesterolün, MI grubundaki kontrollerden daha yüksekti (P <0,001), S.LDL'nin MI grubunda anlamlı olarak daha yüksek olduğunu gösterdi (P <0,0001), MI grubundaki S.HDL ise kontrol grubuna göre anlamlı olarak daha düşüktü (P <0,001).