Purification and Characterization of Glutathione Reductase From Japanese Quail (Coturnix Coturnix Japonica) Liver

Abstract

ABSTRACT: In this study, glutathione reductase (Glutathione: NADP+ oxidoreductase, E.C 1.8.1.7; GR) was purified from quail`s liver by using ammonium sulfate precipitation and 2',5'-ADP Sepharose-4B gel affinity chromatography. GR enzyme was obtained having a specific activity of 22.75 EU/mg proteins, with a yield 13.6% and 142.18 purification fold. Enzymatic activity was measured spectrofotometrically according to Beutler`s method at 340 nm. Subunits molecular weight of enzyme was determined by SDS-PAGE as 59 kDa. Optimal pH, optimal ionic strength, stable pH, optimal temperature were determined as 8.0, 0.6 mM, 8.0, 85 °C respectively. Also KM and Vmax values were determined for NADPH as 0.109 mM and 0.603 EU/mL; and for GSSG substrates 0.044 mM and 0.272 EU/mL respectively.

ÖZET: Yüksek lisans tezi olarak sunuçu bu çalşmadan, glutatyon redüktaz (Glutatyon: NADP+, oksidoredüktaz, E.C 1.8.1.7.; GR) enzimi bıldırcın karaciğerinden amonyum sülfat çöktürmesi ve 2',5'-ADP Sepharose-4B afinite kromatografisi olmak üzere 2 basamakta saflaştırıldı. 22,75 EÜ/mg protin spesifik aktivitesine sahip olan GR enzimi %13,6 verimle, 142,18 kat saflaştırıldı. Enzim aktivitesi spektrofotometrik olarak 340 nm‟de Beutler metoduna göre ölçüldü. Enzimin alt biriminin mol kütlesi ise SDS-PAGE ile 59 kDa olarak bulundu. Enzim için optimum pH, optimum iyonik şiddet, optimum sıcaklık, stabil pH, sırasıyla 8, 100 mM, 8, ve 85ºC olarak bulundu. Ayrıca NADPH için KM değeri 0,109 mM ve Vmax değeri 0,603 EÜ/mL olarak; GSSG için ise, KM değeri 0,044 mM ve Vmax değeri 0,272 EÜ/mL olarak tespit edildi.