Glutatyon S-Transferaz (GST) Enziminin Japon Bıldırcın (Coturnix Coturnix Japonica) Karaciğerinden Saflaştırılması ve Karakterizasyonu

Abstract

ÖZET: Bu çalışmada, glutatyon S-transferaz (GST; EC 2.5.1.18) enzimi bıldırcın karaciğerinden amonyum sülfat çöktürmesi ve glutatyon-agaroz afinite kromatografisi kullanılarak 15,86 EÜ/mg protein spesifik aktivite ile %12,36 verimle 46,1 kat saflaştırıldı. Enzim saflığını kontrol etmek ve alt birim molekül kütlelerini belirlemek amacıyla SDS-PAGE yapıldı ve tek bant elde edildi. Bıldırcın karaciğerinden saflaştırılan GST enziminin alt birim molekül kütlesi yaklaşık olarak 25,1 kDa belirlendi. Bıldırcın karaciğerinden saflaştırılan GST enzimi için yapılan karakterizasyon çalışmalarında; optimum pH, Tris-HCI tamponu pH=8,5, optimum iyonik şiddet, Tris-HCI tamponu 1,4 M, stabil pH, Tris-HCI tamponu pH = 8,5 ve optimum sıcaklık 55oC olarak bulundu. Saf enzime ait KM ve Vmax değerleri Lineweaver-Burk grafiklerinden faydalanılarak GSH substratı için KM, 0,114 mM, Vmax 0,672 EÜ/mL; CDNB substratı için KM, 0,048 mM, Vmax, 0,047 EÜ/ mL olarak hesaplandı.

ABSTRACT: In the present study, glutathione S-transferase enzyme (GST; EC 2.5.1.18) was purified from quail (Coturnix, coturnix japonica) liver with 15.86 EU/mg specific activity, in a yield of 12.36%, 46.1 purification fold, by ammonium sulfate precipitation and glutathione agarose affinity chromatography. SDS-PAGE was performed to control enzyme purity and to determine subunit molecular masses and single band was obtained. The subunit molecular mass of the GST enzyme purified from the quail liver was determined as approximately 25.1 kDa. Quail liver GST enzyme characterization studies carried out; optimum pH, Tris-HCl buffer pH = 8.5, optimum ionic strength, Tris-HCl buffer 1.4 M, stable pH, Tris-HCl buffer pH = 8.5 and optimum temperature was found as 55 oC. KM and Vmax values of pure enzyme were obtained from Lineweaver-Burk graphs. For the GSH substrate, KM 0.114 mM, Vmax 0.672 EU / mL, for CDNB substrate, KM 0.048 mM, Vmax 0.047 EU / mL was calculated respectively.