Bazı İlaçların İnsan Eritrosit Glutatyon Redüktaz Enzimi Üzerine İn Vitro Etkilerinin İncelenmesi

Abstract

ÖZET: Glutatyon redüktaz enzimi hemen hemen bütün canlı hücrelerde yükseltgenmiş olan glutatyonu (GSSG) özellikle NADPH üretiminde kullanılan indirgenmiş glutatyona (GSH) dönüştüren hayati öneme sahip antioksidan bir enzimdir. Bu öneminden dolayı enzim bu tez kapsamında insan eritrositlerinden 2', 5' ADP Sepharose-4B jelinin kullanıldığı afinite kromatografisi yardımıyla saflaştırıldı. Saflaştırmanın olup olmadığı SDS-PAGE ile kontrol edildi ve fotoğraflandı.Daha sonra saf glutatyon redüktaz enzimi kullanılarak bazı ilaçların enzim üzerindeki etkileri araştırıldı. Bu kapsamda daha önce çalışılmamış askorbik asit, beloc, tylosin, prednol ve levofloksasin ilaçları tercih edildi. Yapılan kinetik çalışmalarda beloc ve prednolun çalışılan konsantrasyon aralığında enzim üzerinde herhangi bir etkilerinin olmadığı tespit edildi. Tylosin ve levoflaksasin ilaçlarının ise çalışılan derişim aralıklarında enzimi aktive ettikleri belirlendi. C vitamini ile yapılan kinetik çalışmalarda ise enzimin önemli derecede inhibisyona uğradığı gözlendi. C vitamini için IC50 değeri 115,5 mM, Ki sabiti ise 243,143±54,95 mM olarak hesaplandı.

ABSTRACT: Glutathione reductase enzyme is a vital antioxidant enzyme that converts oxidized glutathione (GSSG) in almost all living cells into reduced glutathione (GSH), which is especially used in NADPH production. Due to this importance, the enzyme was purified from human erythrocytes within the scope of this thesis with the help of affinity chromatography using 2', 5' ADP Sepharose-4B gel. Purification was checked by SDS-PAGE and photographed. Then, the effects of some drugs on the enzyme were investigated using pure glutathione reductase enzyme. In this context, previously unstudied drugs such as ascorbic acid, beloc, tylosin, prednol and levofloxacin were preferred. In the kinetic studies, it was determined that beloc and prednol did not have any effects on the enzyme in the concentration range studied. It was determined that the drugs tylosin and levoflaxacin activated the enzyme in the concentration ranges studied. In kinetic studies conducted with vitamin C, it was observed that the enzyme was significantly inhibited. The IC50 value for vitamin C was calculated as 115.5 mM, and the Ki constant was calculated as 243.143±54.95 mM.